原位雜交技術(shù)流程（原位雜交技術(shù)步驟）
發(fā)布日期：2024-06-04 04:02:08 來源： 編輯：
哈嘍,小天來為大家解答以下的問題，關(guān)于原位雜交技術(shù)流程，原位雜交技術(shù)步驟這個很多人還不知道,那么現(xiàn)在讓我?guī)е蠹乙黄饋砜纯窗桑?/p>
這個問題問到點子上了，呵呵 比如： 1.浸入乙酸酐（acetic anhydride）和三乙醇胺（tri－ethanolamine）中以減低靜電效應(yīng)，減少探針對組織的非特異性背景染色。
2.將組織切片浸入預(yù)雜交液中可達到封閉非特異性雜交點的目的，從而減低背景染色。
預(yù)雜交液和雜交液的區(qū)別在于前者不含探針和dextran sulphate。
3.雜交的溫度和時間雜交的溫度也是雜交成功與否的一個重要環(huán)節(jié)，大約在30～60℃之間，根據(jù)探針的種類不同，溫度略有差異，雜交的時間如過短會造成雜交不完全，而過長則會增加非特異性染色。
4.雜交嚴格度（hybridization stringency）雜交條件的嚴格度（stringency）表示通過雜交及沖洗條件的選擇對完全配對及不完全配對雜交體的鑒別程度。
通過控制雜交溫度、鹽濃度等，可減弱非特異性雜交體的形成，提高雜交的特異性。
5.洗滌的條件如鹽溶液的濃度、溫度、洗滌次數(shù)和時間因核酸探針的類型和標(biāo)記的種類不同而略有差異，一般遵循的共同原則是鹽溶液濃度由高到低而溫度由低到高。
必須注意的是在漂洗的過程中，切勿使切片干燥。
干燥的切片即使大量的溶液漂洗也很難減少非特異性結(jié)合，從而增強了背景染色。
本文分享完畢，希望對大家有所幫助。
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