重組質(zhì)粒的原理（重組質(zhì)粒的構(gòu)建步驟）
關(guān)于重組質(zhì)粒的原理，重組質(zhì)粒的構(gòu)建步驟這個很多人還不知道，今天菲菲來為大家解答以上的問題，現(xiàn)在讓我們一起來看看吧！
1、重組質(zhì)粒構(gòu)建是常用的分子生物學(xué)手段，其實只是最基本的方法，一般一個星期同時構(gòu)建三二個組質(zhì)粒是沒有問題的。
2、在國內(nèi)先進(jìn)的實驗中，也大都是由實驗員搞定。
3、但是其中還是有些基本的技巧需要掌握。
4、在這里將我的心得分享于大家，這也是我本人幾年來一線工作時的經(jīng)驗積累，以期能為谷友提供借鑒，讓大家在實驗中少走彎路。
5、所涉及內(nèi)容如下： 1) 克隆基因的酶切位點問題 2) 載體酶切的問題 3) 連接片段濃度比的問題 在闡明上述問題同時，本人盡可能舉些實驗中的問題案例予以說明。
6、 一、克隆基因的酶切位點問題 克隆位點選擇的問題。
7、首先要對目標(biāo)基因進(jìn)行酶切位點掃描分析，列出其所含酶切位點清單。
8、然后對照質(zhì)粒多克隆位點，所選擇的克隆位點必須是目標(biāo)基因所不含的酶切位點。
9、這是常識，不贅述。
10、 2、保護(hù)堿基數(shù)目的問題。
11、在設(shè)計PCR引物時，引入酶切位點后，常常要加入保護(hù)堿基，這是大家所熟知的。
12、但是保護(hù)堿基數(shù)量多少，可能被新手所忽視。
13、這種忽視碰可能會大大影響后續(xù)的實驗進(jìn)展。
14、 一般情況下，普通的內(nèi)切酶只加入兩個保護(hù)堿基，其內(nèi)切反應(yīng)就可以正常進(jìn)行；而有一類，僅僅只加入兩個保護(hù)堿基，其內(nèi)切反應(yīng)就不能正常進(jìn)行，這是因為內(nèi)切酶不能正常結(jié)合DN段上。
15、如NdeI就屬這類，需要加入至少6個保護(hù)堿基，常用的HindIII也要三個。
本文到此分享完畢，希望對大家有所幫助。
標(biāo)簽： 重組質(zhì)粒的構(gòu)建步驟