snapgene如何設(shè)計(jì)引物（如何設(shè)計(jì)引物）
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1、一般是通過(guò)設(shè)計(jì)軟件，例如oligo6，primer5等，你可以在網(wǎng)上搜一下引物設(shè)計(jì)軟件下載和使用說(shuō)明，是比較容易的。
2、至于設(shè)計(jì)引物的一般原則如下：* 序列選取應(yīng)在基因的保守區(qū)段* 避免引物自身或與引物之間形成4個(gè)或4個(gè)以上連續(xù)配對(duì)，避免引物自身形成環(huán)狀發(fā)卡結(jié)構(gòu) * 典型的引物18到24個(gè)核苷長(zhǎng)。
3、引物需要足夠長(zhǎng)，保證序列獨(dú)特性，并降低序列存在于非目的序列位點(diǎn)的可能性。
4、但是長(zhǎng)度大于24核苷的引物并不意味著更高的特異性。
5、較長(zhǎng)的序列可能會(huì)與錯(cuò)誤配對(duì)序列雜交，降低了特異性，而且比短序列雜交慢，從而降低了產(chǎn)量。
6、* Tm值在55－65℃（因?yàn)?0℃核酸外切酶活性最高），GC含量在40%－60%* 引物之間的TM相差避免超過(guò)2℃* 引物的3’端避免使用堿基A，引物的3’端避免出現(xiàn)3個(gè)或3個(gè)以上連續(xù)相同的堿基* 為避免的擴(kuò)增，引物設(shè)計(jì)最好能跨兩個(gè)外顯子。
7、* Taqman探針PCR要求片段長(zhǎng)度在80bp－150bp * 引物末端（最后5個(gè)核苷酸）不能有超過(guò)2個(gè)的G和C。
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