關(guān)于snapgene如何設(shè)計引物，如何設(shè)計引物這個很多人還不知道，今天菲菲來為大家解答以上的問題，現(xiàn)在讓我們一起來看看吧！

1、一般是通過設(shè)計軟件，例如oligo6，primer5等，你可以在網(wǎng)上搜一下引物設(shè)計軟件下載和使用說明，是比較容易的。

2、至于設(shè)計引物的一般原則如下：* 序列選取應(yīng)在基因的保守區(qū)段* 避免引物自身或與引物之間形成4個或4個以上連續(xù)配對，避免引物自身形成環(huán)狀發(fā)卡結(jié)構(gòu) * 典型的引物18到24個核苷長。

3、引物需要足夠長，保證序列獨特性，并降低序列存在于非目的序列位點的可能性。

4、但是長度大于24核苷的引物并不意味著更高的特異性。

5、較長的序列可能會與錯誤配對序列雜交，降低了特異性，而且比短序列雜交慢，從而降低了產(chǎn)量。

6、* Tm值在55－65℃（因為60℃核酸外切酶活性最高），GC含量在40%－60%* 引物之間的TM相差避免超過2℃* 引物的3’端避免使用堿基A，引物的3’端避免出現(xiàn)3個或3個以上連續(xù)相同的堿基* 為避免的擴增，引物設(shè)計最好能跨兩個外顯子。

7、* Taqman探針PCR要求片段長度在80bp－150bp * 引物末端（最后5個核苷酸）不能有超過2個的G和C。

本文到此分享完畢，希望對大家有所幫助。

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